Exp Hematol Oncol. 2026 ago 8; 15(1): 74. doi: 10.1186/s40164-026-00814-z.

RESUMO

A ativação seletiva de genes terapêuticos em tumores continua sendo desafiadora, pois os promotores enriquecidos em tumor frequentemente exibem atividade basal em células não alvo e podem não capturar completamente a heterogeneidade intratumoral. Além disso, a expressão direta impulsionada por promotor de cargas citotóxicas ou supressoras de tumores pode ser vulnerável a vazamentos de promotores, comprometendo a especificidade e a segurança. Aqui, desenvolvemos SLICER, um circuito gênico Cre-loxP de dois vetores entregue por vírus adeno-associado (AAV) que integra um sensor impulsionado pelo promotor do alfa-fetoproteína (AFP) com controle pós-transcricional por meio de elementos de reconhecimento de microRNA (miRNA) para miR-21 e miR-122. Este design de dupla camada separa a detecção do contexto tumoral da ativação de cargas a jusante, convertendo o acúmulo de Cre dependente do contexto em expressão de carga controlada por recombinação a partir do vetor atuador. Em modelos de células tumorais de fígado ativas para AFP, incluindo HepG2, Huh7 e PLC/PRF/5, o SLICER induziu expressão robusta de Cre e ativação de luciferase dependente de loxP, enquanto células não alvo/comparadoras mostraram atividade de fundo mínima e toxicidade funcional limitada. A mutação dos elementos de reconhecimento de miR-21 e/ou miR-122 aumentou o acúmulo de Cre e a saída do repórter, apoiando um mecanismo de controle dependente de MRE que contribui para a especificidade do circuito. Uma carga útil pró-apoptótica de BAX desencadeou apoptose dependente de caspase em células alvo, parcialmente atenuada por Z-VAD-FMK, enquanto células não alvo permaneceram em grande parte não afetadas. A perturbação das entradas de miRNA ajustou ainda mais a saída do circuito, consistente com a regulamentação guiada por miRNA. O SLICER também acomodou cargas úteis modulares de supressores de tumor, incluindo TP53 e PTEN, apoiando a intercambiabilidade da camada atuadora. In vivo, a entrega sistêmica de AAV do SLICER-TP53 suprimiu o crescimento tumoral e reduziu a carga tumoral nos modelos xenotransplantados de HepG2 e Huh7, acompanhada pelo aumento da expressão de P53 intratumoral. Juntos, esses achados estabelecem o SLICER como uma plataforma modular de prova de conceito para o controle transcricional e pós-transcricional combinatorial da ativação de genes terapêuticos em contextos de tumores de fígado ativos para AFP, enquanto apoiam o desenvolvimento adicional de circuitos gênicos logicamente controlados para uma entrega de carga útil mais precisa e seletiva para tumores.

PMID: 42571006 | PMC: PMC13452114 | DOI: 10.1186/s40164-026-00814-z

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